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【Application Note】类肽和肽-类肽杂交体的自动合成

 更新时间:2023-11-15 点击量:455


--摘要--


  • Liberty BlueTM自动微波肽合成仪允许快速高效地获取肽、类肽和类肽-肽杂交体

  • 肽-类肽混合物 Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly-(NLys)-NH2 在 2 小时内合成,纯度为81%


--简介--


类肽是各种 N-取代的甘氨酸的聚合物。虽然在结构上与肽相似(图 1),但类肽对蛋白水解降解具有抗性,这归因于它们的酰胺键的全部取代。 类肽在体内的稳定性提高,使其成为药物发现和开发的有吸引力的类肽靶标1,2。


类肽图片1.png

图1. 多肽和类肽的结构比较


类肽和类肽-肽杂化物通常通过“亚单体"过程合成,该过程包括两个步骤:(1) 用溴乙酸和 N,N' 二异丙基碳二亚胺(DIC) 酰化和 (2) 用单取代胺进行亲核置换 (图2)1,3。


类肽图片2.png

图2. 典型的类肽合成


由于许多结构不同的单取代胺可商购获得,因此可以很容易地合成具有多种侧链的类肽2,3 。然而,类肽的常规合成每个残基可能需要长达三个小时1 。微波辐射已被证明可以显着减少合成时间,使类肽文库和类肽-肽杂交体的生产更加可行 1-3。


--材料和方法--


试剂


所有氨基酸均获自 CEM Corporation (Matthews, NC),并含有以下侧链保护基团:Glu(OtBu) 和 Lys(Boc)。 Oxyma Pure 和Rink Amide ProTideTM LL 树 脂 购 自 CEM Corporation (Matthews, NC)。 溴乙酸、N,N二异丙基碳二亚胺 (DIC)、苄胺、β-丙氨酸叔丁酯盐酸盐、哌啶、氟乙酉夋 (TFA)、3,6-二氧六环-1,8-辛二硫醇 (DODT)、三异丙基硅烷 (TIS) 和 乙酸购自Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)。 N-Boc-1,4-二氨基丁烷和异丁胺购自 Alfa Aesar (Ward Hill, MA)。 二氯甲烷 (DCM)、N,N 二甲 基 甲 酰 胺 (DMF) 和 无 水 乙 酉迷 (Et2O) 购 自 VWR (West Chester, PA)。 HPLC 级水 (H2O) 和 HPLC 级乙腈 (MeCN) 购自Fisher Scientific (Waltham, MA) 。


类肽-多肽杂交体合成:Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly- (NLys)-NH2


使用 CEM Liberty Blue 自动微波肽合成仪在 Rink Amide ProTide LL 树脂(离子交换容量:0.18 meq/g )上以 0.1 mmol 的规模制备类肽-肽混合物(图 3)。 对于类肽残基,用哌啶在 DMF 中进行脱保护,用溴乙酸和 DIC 进行酰化,并用 DMF 中的单取代胺进行亲核置换。 对于肽残基,用哌啶在 DMF 中进行脱保护,并用 5 倍过量的 Fmoc-AA-OH、DMF 中的 DIC 和 DMF 中的 Oxyma Pure 进行偶联反应。 使用具有 TFA/H2O/TIS/DODT 的 CEM Razor 高通量肽切割系统进行切割。 裂解后肽在无水乙酉迷中沉淀并冻干过夜。

类肽图片3.png

图3. 目标类肽-多肽杂交体: Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly-(NLys)-NH2


类肽-多肽杂交体分析


在配备有 PDA 检测器的 Waters Acquity UPLC 系统上分析类肽-肽混合物,该检测器配备 Acquity UPLC BEH C8 色谱柱(1.7 mm 和 2.1 x 100 mm)。UPLC 系统连接到 Waters 3100 Single Quad MS 用于结构测定。在 Waters MassLynx 软件上进行峰分析。使用 (i) H2O 和 (ii) MeCN 中的 0.1% TFA 梯度洗脱进行分离。


--结论--


在 Liberty Blue 自动微波肽合成仪上,Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)- Gly(NLys)-NH2 的微波增强 SPPS 产生了纯度为 81% 的目标肽(图 4)。


类肽图片4.png

图4. Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly-(NLys)-NH2的UPLC色谱图


结果


CEM Liberty Blue 自动微波肽合成仪允许快速有效地获取肽、类肽和类肽-肽杂交体。 微波增强的 SPPS 产生了纯度为 81% 的类肽-肽杂交体 Pro-Glu-(NLeu)-(NPhe)-Gly-(NLys)-NH2


参考文献


1.Olivos, H. J.; Alluri, P. G.; Reddy, M. M.; Salony, D.; Kodadek, T. Org. Lett. 2002, 4, 4057–4059.

2.Unciti-Broceta, A.; Diezmann, F.; Ou-Yang, C. Y.; Fara, M. A.; Bradley, M. Bioorg. Med. Chem. 2009, 17, 959–966.

3.Gorske, B. C.; Jewell, S. A.; Guerard, E. J.; Blackwell, H. E. Org. Lett. 2005, 7, 1521–1524.