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一种从热带木本植物中无毒组织研磨提取核酸的方法

  发布时间:2019/12/19 点击量:785

    木本热带植物中含有大量复杂的有机化合物,这些有机化合物会抑制提取RNA或DNA所需的化学程序,从而不利于后续研究及应用,如RNA测序和基因表达分析。为了克服这个问题,研究人员必须使用CTAB / PVP缓冲液的提取方案,而不能使用市售的DNA / RNA提取试剂盒。但是,这种提取方式耗时长、需使用有毒化学品(例如苯酚和CHCl3),并且一次只能处理少量样品。为了克服这些问题,我们开发了一种基于CTAB / PVP的新方法,用于RNA或DNA提取,去掉了传统方法中的苯酚/CHCl3步骤。此外,该方法同样适用于96孔深孔板,使用SPEX高通量组织研磨仪,一次研磨6块深孔板,同时处理576个样品,大大加快了处理速度。

 

    我们的新方法,能够从夏威夷果、牛油果和芒果组织中,成功提取RNA,这些组织使用传统方法很难提取到RNA。而后我们还验证了,该方法提取的RNA成功地合成cDNA,以进行实时定量PCR并生成高质量的RNA-Seq库。该方法经轻微改动后,可用于从不同的热带和亚热带树种中快速提取DNA。

 

    这种方法可以更安全、更快速地从困难样品中提取DNA和RNA,从而为将来在热带树木上的研究提供了便利。

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